蜂王漿中葵烯酸檢測(cè)分析液相色譜詳細(xì)說(shuō)明
? 蜂王漿是世界上公認(rèn)的***可供人類直接服用的高活性成分的超級(jí)營(yíng)養(yǎng)食品。?10- 羥基-2- 癸烯酸(10-HDA)是蜂王漿中特有的一種不飽和脂肪酸,由于這種酸在自然界的其它物質(zhì)中沒(méi)有,只存在于蜂王漿中,所以也稱為王漿酸。分離出的純王漿酸呈白色晶體,在新鮮的蜂王漿中多以游離形式存在,性質(zhì)比較穩(wěn)定,具有很好的**、抑菌、抗疲勞、**老作用和***、抗放射的功能,為此許多保養(yǎng)食品均添加有蜂王漿。因此作為評(píng)價(jià)蜂王漿及其制品***劣的主要指標(biāo)之一的10-HDA 含量測(cè)定顯得尤其重要。至今為止,10-HDA 含量測(cè)定有薄層掃描法、分光光度法、氣相法、液相法,且多見于分析蜂王漿中的10-HDA 。薄層掃描法、分光光度法專屬性和準(zhǔn)確性較差,氣相法處理繁瑣,目前**為通用的是H P L C法。液相法處理簡(jiǎn)單、結(jié)果準(zhǔn)確,本公司基于以上情況,建立了超聲提取、冷藏沉淀后,用對(duì)羧基苯甲酸乙酯做內(nèi)標(biāo),反相液相色譜法測(cè)定蜂王漿及其制品中1 0 -H D A 含量的方法,取得了令人滿意的結(jié)果。 一、主要性能特點(diǎn):??? 1)、蜂王漿中葵烯酸檢測(cè)分析液相色譜儀LC-3000C整套系統(tǒng)由P3000高壓輸液泵(二元梯度)、UV3000分光檢測(cè)器、分析型動(dòng)態(tài)高壓混合器、進(jìn)樣閥、溶劑托盤、色譜柱、反控色譜工作站軟件等組成;安裝、調(diào)試及使用都非常簡(jiǎn)單。? 2)、P3000高壓輸液泵是以CPLD技術(shù)為**,由單片機(jī)控制的高精密輸液泵系統(tǒng)。全數(shù)字頻率發(fā)生系統(tǒng),**的馬達(dá)驅(qū)動(dòng)系統(tǒng)友好的人機(jī)顯示界面使操作很方便,**的泵頭及單項(xiàng)閥設(shè)計(jì)思路,融匯了當(dāng)今世界上**的經(jīng)驗(yàn),使該系統(tǒng)在各種條件下都能保證輸液的精度及重復(fù)性。? ? 3)、UV3000是一種分光檢測(cè)器,可以匹配任何輸液泵,適用于化學(xué)分析、農(nóng)*、制*、化工等領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用。采用了全數(shù)字、高集成化設(shè)計(jì)理念,**降低儀器的噪聲;基于數(shù)字信號(hào)傳輸和處理,該檢測(cè)器的信號(hào)可直接輸入到計(jì)算機(jī)的串行口進(jìn)行采集,完全甩掉了傳統(tǒng)儀器必須使用的數(shù)據(jù)采集卡! ? ? 二、儀器主要配置和檢測(cè)分析條件: (1).?主要儀器配置: 1、LC-3000高效液相色譜儀;2、色譜柱:C18,250*4.6*10 或250*4.6*5 3、高速離心機(jī)(大于4500r/min;50ml)4、超聲波震蕩儀;5、渦旋混合器; 6、分析天平(萬(wàn)分之一);7、溶劑過(guò)濾器(帶0.45um有機(jī)、水系過(guò)濾膜和真空泵); (2)、主要試劑: 1.純凈水(二次蒸餾水)? 2.甲醇:分析醇? 3.乙醇:優(yōu)級(jí)純?? 4.內(nèi)標(biāo)物:對(duì)羥基苯甲酸甲酯含量99.0%?? 5.10-HAD標(biāo)準(zhǔn)品:99.0%以上。使用前應(yīng)在放有濃**的減壓干燥器內(nèi)減壓干燥24h 6.10-HAD標(biāo)準(zhǔn)溶液:取干燥后的10-HAD標(biāo)準(zhǔn)品約25mg,精密稱定,加無(wú)水乙醇溶解并移入1000ml容量瓶中,用無(wú)水乙醇稀釋至刻度,搖勻。此溶液每毫升含內(nèi)標(biāo)物約0.65mg。7.鹽酸(C=0.03mol/L):量取0.1mol/L鹽酸100ml,加入200ml重蒸餾水中。 (3).色譜條件: 色譜柱為Kromasil C18 柱,流動(dòng)相為V(甲醇):V(水):V(磷酸)=55:45:0.2,流速1.0ml/min,對(duì)羧基苯甲酸乙酯作內(nèi)標(biāo),檢測(cè)波長(zhǎng)210nm。本法簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確,重現(xiàn)性好,回收率高(97.6%~101.8%)。 (4).樣品處理 樣品解凍至室溫后用玻璃棒攪勻,取約0.5g,置于已稱定的50ml容量瓶中,精密稱定,加0.03mol/L鹽酸1ml和水2ml,置漩渦混合器上混合使樣品溶解,加無(wú)水乙醇30ml,邊加邊輕輕搖動(dòng),再精密加入內(nèi)標(biāo)溶液10ml,并用無(wú)水乙醇稀釋至刻度,搖勻,立即置超聲波中超聲15min,或置漩渦混合器上振蕩15min,取出,在3000r/min下離心10min后測(cè)定。如不能及時(shí)測(cè)定,應(yīng)放置在冰箱中冷藏待測(cè)。