實(shí)驗(yàn)原理 本試劑盒為一種直接競(jìng)爭(zhēng)ELISA試劑盒。在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原；加入樣品或標(biāo)準(zhǔn)品，樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中的去氫表雄酮與微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合酶標(biāo)記的去氫表雄酮多克隆抗體，游離的酶標(biāo)記抗體通過洗滌被出去；再加入顯色液，結(jié)合的酶標(biāo)記抗體是無(wú)色的顯色液轉(zhuǎn)化為藍(lán)色，加入反應(yīng)終止液后再轉(zhuǎn)化為黃鱔，在450nm處測(cè)量，樣品吸光值與樣品中的去氫表雄酮含量成負(fù)相關(guān)，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線即可計(jì)算出樣品中去氫表雄酮含量。 ? ? 試劑盒技術(shù)指標(biāo) 檢測(cè)限：? 0.1ppb 檢測(cè)范圍：0.1 ppb ? 62.5ppb ? ? 交叉反應(yīng)： Androsterone（雄甾酮）???????? 0.1％ Androstenedione(雄烯二酮)?????? 0.25％ Etiocholanolone（本膽烷醇酮）?? 0.1％ Testosterone（睪丸酮）????????? 0.01％ Cortisol（皮質(zhì)醇）????????????? 0.01％ Progesterone（孕酮）??????????? 0.25％ Estradiol（雌二醇）???????????? 0.01％ ? ? 試劑盒組成及試劑配制 1.???????? 酶標(biāo)板：96T/8孔 2.???????? 標(biāo)準(zhǔn)品溶液：0ppb,0.1ppb,0.5ppb,2.5ppb,12.5ppb,62.5ppb（1ml/瓶） 3.???????? 酶標(biāo)記物液：??? 7ml/瓶。 4.???????? 底物緩沖液：??? 7ml/瓶。 5.???????? 底物液：??????? 7ml/瓶。 6.???????? 終止液：??????? 7ml/瓶 7.???????? 20倍濃洗滌液：? 50ml/瓶。 ? ? 樣品前處理方法： ? 1. 膠囊類樣品：取片劑或膠囊試樣進(jìn)行粉碎混勻，稱取0.1000g試劑（準(zhǔn)確至0.001g）于離心管中，加入1ml甲醇使用超聲提取5min后以3000r/min離心3min。準(zhǔn)確取0.1ml試樣定容至1ml，檢測(cè)時(shí)加入50微升進(jìn)行檢測(cè)。 2. 茶葉樣品：用研缽研碎茶葉樣品，稱取1g研碎的樣品，加入1ml甲醇，漩渦混勻5min后，放振蕩器上震蕩15min；3000r/min離心3min，轉(zhuǎn)移出上清，取0.1ml定容至1ml。取50μL進(jìn)行分析。 3.血清樣品：將血清3000r/min離心3min，取上清50μL進(jìn)行分析。 ? ? 操作步驟 1.? 加試劑盒從冷藏環(huán)境中取出，置于室溫下平衡30min以上。 2.? 加樣：加入50μL標(biāo)準(zhǔn)品或50μL待測(cè)樣品，然后每孔加入50μL酶標(biāo)記物，輕輕混勻，室溫下孵育30 min。 3? 洗板4-5次，每次浸泡30秒，拍干。。 4???????? 顯色：每孔加入底物緩沖液50μl，再加底物液50μl，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境避光顯色10min。。 5．測(cè)定：每孔加入終止液50μl，輕輕振蕩勻，設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處（建議用雙波長(zhǎng)450/630nm檢測(cè)，在20min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)），測(cè)定吸光度值。 ? ? 結(jié)果判定 ??以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)（對(duì)數(shù)坐標(biāo)），OD值為縱坐標(biāo)（普通坐標(biāo)），在半對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。 ? ? 注意事項(xiàng) 1、室溫低于20℃或試劑及樣本沒有回到室溫（20-25℃）會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。 2、洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。 3、混合要均勻，洗板要徹底，否則會(huì)出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。 4、反應(yīng)終止液為2M**，避免接觸皮膚。 5、將不用的微孔板放進(jìn)自封袋重新密封 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無(wú)色的發(fā)色劑對(duì)光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。 6、不要使用過了有效日期的試劑盒，不要使用不同批號(hào)試劑盒中的試劑。 7、顯色液若有任何顏色表明變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之，0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.6時(shí)，表示試劑可能變質(zhì)。 ? 儲(chǔ)藏條件和保質(zhì)期 儲(chǔ)藏條件：試劑盒于2-8℃保存，不要冷凍。 保 質(zhì) 期：該產(chǎn)品有效期為1年，生產(chǎn)日期見包裝盒