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      食品、飲料加工設(shè)備 ? 保鮮冷藏設(shè)備 ? 三聚氰胺ELISA試劑盒

      三聚氰胺ELISA試劑盒

      • 產(chǎn)品價(jià)格:面議
      • 所屬行業(yè):保鮮冷藏設(shè)備
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      • ***更新:2016-12-30 11:30:54
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      • 公司名稱(chēng):蘇州艾瑞德生物科技有限公司
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      三聚氰胺ELISA試劑盒詳細(xì)說(shuō)明

      一、原理 本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法,在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原,樣本中的三聚氰胺和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)三聚氰胺抗體,加入酶標(biāo)記物后,用底物顯色,樣本吸光值與其所含殘留物三聚氰胺的含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較可得出相應(yīng)三聚氰胺的含量。 ? 二、試劑盒檢測(cè)限 試劑盒檢測(cè)限:???????? 10 ng/mL ? 三、?試劑盒組成 1.預(yù)包被板:96T 2.標(biāo)準(zhǔn)品液:(1mL/瓶) 0 ng/mL、20 ng/mL、100 ng/mL、500 ng/mL 3.酶標(biāo)記物????????? 12 mL 4.抗體工作液???????  7 mL 5.底物緩沖液? ?????? 7 mL 6.底物液???????????  7 mL 7.終止液???????????  7 mL 8.20倍濃縮洗滌液??? 50 mL ? 四、樣本處理 配制樣品稀釋液: 稱(chēng)取89.5 g Na2HPO4?12H2O ,蒸餾水定容至1000 mL。 ? 濕的寵物食品萃取方法(稀釋100倍) 1.勻質(zhì)樣品到布丁狀; 2.稱(chēng)取2 g樣品加入10 mL 60%甲醇水溶液,并劇烈振蕩; 3.超聲萃取1 min,漩渦混合1 min,然后靜止5 min,使樣品分層; 4.5000 r/min室溫離心5 min,用玻璃纖維濾紙過(guò)濾上清液,并將其收集于干凈試管中; 5.用樣品稀釋液將濾液20倍稀釋?zhuān)?6.取50 μL進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。 ? 干的寵物食品萃取方法(稀釋200倍) 1.均質(zhì)干的寵物飼料樣品; 2.稱(chēng)取1 g樣品加入10 mL 60%甲醇水溶液,并劇烈振蕩; 3.超聲萃取1 min,漩渦混合1 min,然后靜止5 min,使樣品分層; 4.5000 r/min室溫離心5 min,用玻璃纖維濾紙過(guò)濾上清液,并將萃取液收集于干凈試管中; 6.用樣品稀釋液將濾液20倍稀釋?zhuān)?7.取50 μL進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。 ? ? 液態(tài)奶/乳飲料(稀釋5倍) 1.? 準(zhǔn)確吸取1 mL液態(tài)奶或乳飲料于干凈離心管中,冷藏至4℃?zhèn)溆茫?2.? 將1 mL液態(tài)奶或乳飲料樣品置于離心機(jī)中,5000 g離心10 min(建議10℃低溫離心),分離樣品中脂肪; 3.? 棄上層脂肪,取0.2 mL離心后的脫脂液態(tài)奶或乳飲料試樣于干凈試管中; 4.? 加入0.8 mL樣品稀釋液于離心后的脫脂液態(tài)奶或乳飲料中,振蕩混勻樣品,取50 μL進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。 奶粉(稀釋25倍) 1. 稱(chēng)取1 g奶粉樣品于干凈試管中; 2. 加入5 mL的45~50℃溫水溶解奶粉并混勻后冷藏至4℃?zhèn)溆茫?3. 取1 mL溶解好的奶粉試樣于離心管中,5000 g離心10 min(建議10℃低溫離心),棄上層脂肪,取0.2 mL試樣于干凈試管中; 4.加入0.8 mL樣品稀釋液于試管中,振蕩混勻取50 μL進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。 酸奶:(稀釋5倍) 1. 準(zhǔn)確吸取1 mL液態(tài)奶或乳飲料于干凈離心管中,將PH值調(diào)至6~8,冷藏至4℃?zhèn)溆茫?2. 將1 mL樣品置于離心機(jī)中,5000 g離心10 min(建議10℃低溫離心),棄上層脂肪,取0.2 mL試樣于干凈試管中; 3. 加入0.8 mL樣品稀釋液于試管中,振蕩混勻取50 μL進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。 初乳樣品:(稀釋1倍) 直接法:將樣品4℃冷藏30 min后,4000 r/min離心15 min,棄去上層脂肪,取50 μL進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。 ? 五、操作步驟 1.將試劑盒從冷藏環(huán)境中取出,置于室溫(20~26℃)下平衡30min以上,將需用的板條放入支架,按順序編號(hào); 2.洗液配制:將50 mL濃縮洗滌液(20倍濃縮)用去離子水稀釋至1000 mL備用(或按需量稀釋?zhuān)?3.在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入50 μL標(biāo)準(zhǔn)品,樣品孔加入50 μL待測(cè)樣品,然后每孔加入50 μL抗體(加入標(biāo)品和樣品時(shí)無(wú)時(shí)間差的影響),輕拍混勻,37℃下孵育40 min; 4.倒出孔中的液體,用洗板機(jī)洗滌4~6遍;沒(méi)有洗板機(jī)的用戶(hù)可用300 μL洗液充入各孔中,靜置20 s,倒出孔中的液體,將微孔架倒置,在吸水紙上連續(xù)拍打3次以上,以保證完全除去孔中的液體,重復(fù)操作4~6遍; 5.加入酶標(biāo)記物100 μL,輕輕振蕩混勻,用蓋板膜蓋板后置37℃ 環(huán)境中反應(yīng)20 min,取出重復(fù)洗板步驟; 6.顯色:每孔加入底物緩沖液50 μL,再加底物液50 μL,輕輕振蕩混勻,用蓋板膜蓋板后,置37℃ 環(huán)境中反應(yīng)10 min; 7.測(cè)定:每孔加入終止液50 μL,輕輕振蕩混勻.設(shè)定酶標(biāo)儀于450 nm處,測(cè)定每孔OD 值,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品濃度。 ? 六、 結(jié)果判定 以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo),以三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品濃度(ng/mL)的半對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度,乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中三聚氰胺實(shí)際濃度。 ? 七、 注意事項(xiàng) 1.試劑及樣本沒(méi)有回到室溫(20~26℃)會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低; 2.洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作; 3.混合要均勻,洗板要徹底,否則會(huì)出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象; 4.反應(yīng)終止液為2 mol/L**,避免接觸皮膚。 5.將不用的微孔板放進(jìn)自封袋重新密封;標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無(wú)色的發(fā)色劑對(duì)光敏感,因此要避免直接暴露在光線下; 6.不要使用過(guò)了有效日期的試劑盒,不要使用不同批號(hào)試劑盒中的試劑; 7.顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之,0濃度標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度值小于0.6時(shí),表示試劑可能變質(zhì); 8.該試劑盒比較好反應(yīng)溫度為37 ℃,溫度過(guò)高或過(guò)低將導(dǎo)致檢測(cè)吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。 ? 八、儲(chǔ)藏條件和保質(zhì)期 儲(chǔ)藏條件:試劑盒于2~8℃保存,不要冷凍。 保 質(zhì) 期:該產(chǎn)品有效期為1年,生產(chǎn)日期見(jiàn)包裝盒。

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